Грам боёгу-бул ыкма жана кыртыш үлгүсүндөгү бактериялардын бар экендигин көрүү үчүн жана клеткалардын дубалынын химиялык жана физикалык касиеттерине негизделген бактерияларды грам-оң же грам-терс деп классификациялоо үчүн колдонулат. Грамдык боек дээрлик дайыма бактериялык инфекцияны аныктоодо биринчи кадам катары колдонулат.
Бул боечу техникасы даниялык окумуштуу Ханс Кристиан Грамдын (1853 - 1938) атынан аталган, ал техниканы 1882 -жылы иштеп чыгып, аны 1884 -жылы окшош клиникалык симптомдору бар бактериялардын эки түрүн айырмалоо ыкмасы катары жарыялаган: Streptococcus pneumoniae (ошондой эле белгилүү Streptococcus pneumoniae). Pneumococci) жана бактериялар Klebsiella pneumoniae.
Кадам
Метод 3: микроскоп слайдын даярдоо
Кадам 1. Лабораторияда иштөөгө даярдануу
Сиз сынап жаткан үлгүнүн бактериялык булгануусун алдын алуу үчүн кол кап жана узун чач галстук тагыңыз. Иштеген жерди түтүн капкагы астында же башка жакшы желдетилген жерде тазалаңыз. Бунзендин күйгүзгүчүн текшериңиз жана микроскоптун иштээрин текшерүүдөн мурун баштаңыз.
Кадам 2. Микроскоптун айнек слайдын стерилизациялоо
Эгерде айнек слайд кир болсо, аны самындуу суу менен жууп, майды жана кирди тазалаңыз. Слайддарды этанол, айнек тазалагыч же лабораторияңыз колдонгон башка ыкма менен тазалаңыз.
Кадам 3. Үлгүнү айнек слайдга коюңуз
Сиз медициналык үлгүдөгү бактерияларды аныктоого же Петри табагында өскөн бактериялардын маданиятын аныктоого жардам берүү үчүн Gram тагы техникасын колдоно аласыз. Эң жакшы натыйжаларга жетүү үчүн, үлгүнүн жука штрихтерине Gram боёгун колдонуңуз. 24 саатка жетпеген үлгүлөрдү колдонуу максатка ылайыктуу, анткени улгайган бактериялар клетка дубалдарын бузуп, Грам боёгонго жооп бербеши мүмкүн.
- Эгер кыртыштын үлгүсүн колдонуп жатсаңыз, айнек слайдына 1-2 тамчы кошуңуз. Үлгү чачыратуунун жука катмарын түзүү үчүн слайдга тегиз жайылып, аны башка стерилдүү айнек слайддын четинен сүрүп коюңуз. Кийинки кадамды жасоодон мурун кургатыңыз.
- Эгерде сиз петри табагынан бактерияларды алып жатсаңыз, Бунзен күйгүзгүчүндө эмдөө циклин жаркыраганга чейин стерилизациялап, андан кийин муздатып коюңуз. Слайдга стерилденген сууну тамчылатуу үчүн укурукту колдонуңуз, андан кийин бактериялардын кичинекей үлгүсүн чогултуу үчүн стерилизациялап, кайра муздатыңыз. Андан кийин акырын аралаштырыңыз.
- Сорподо даярдалган бактерияларды вертелдин жардамы менен кайра козгош керек, андан кийин сууну кошпостон, жогоруда айтылгандай, эмдөө цикли менен алуу керек.
- Эгерде сизде тампондун үлгүсү бар болсо (көбүнчө пахтанын учу бар кичинекей туткасы менен жасалган), таякчаны тийип, акырын айлантыңыз.
Кадам 4. Бир аз жогорку температура жакшы мазактоого жардам берет
Жылуулук бактерияларды слайддын үстүндө кармап турат, андыктан боечу процессинде оңой эле ээрибейт. Слайдды Bunsen күйгүзгүчүнүн үстүнө эки же үч жолу тез таптап коюңуз же слайдды электр жылыткычынын үстүнөн жылытыңыз. Өтө ысып кетпеңиз, үлгү бузулушу мүмкүн. Эгер сиз Bunsen күйгүзгүчүн колдонуп жатсаңыз, ал чоң апельсин жалынынын ордуна кичинекей, бирок көк жалын болушу керек.
Же болбосо, метанол менен мазокту кургатылган майга 1-2 тамчы метанол кошуп, слайдда калган метанолду ачык асман алдында калтыруу менен кургатса болот. Бул ыкма клетканын бузулушун минималдаштырат жана таза слайддын сүрөтүн камсыз кылат
Кадам 5. Слайдды боектордун үстүнө коюңуз
Бояуу табактары металлдан, айнектен же тайыз пластикалык плиталардан жасалган, үстү жумшак торчолуу. Слайддарды ушул торлордун үстүнө коюңуз, ошондо сиз колдонгон суюктук лотокко төгүлүшү мүмкүн.
Эгерде сизде боечу табак жок болсо, пластикалык лотокко слайдды коюп, муздун кубиктерин басып чыгара аласыз
Метод 2 3: Gram Stain Process
Кадам 1. Классовый кызгылт суюктукту мазактын үстүнө куюңуз
Пентетканы колдонуп, бактериялардын үлгүсүн бир нече тамчы кристалл фиолет менен чачыңыз. 30-60 секундга калтырыңыз. Кристалл фиалка (КВ) суудагы эритмеде КВ+ жана хлорид (Cl-) иондоруна бөлүнөт. Бул иондор грам позитивдүү жана грам терс бактериялардын клетка дубалдарына жана клетка мембраналарына кирип кетет. KV+ иону бактерия клеткаларынын терс заряддуу компоненттери менен өз ара аракеттенип, клеткаларга кызгылт көк түс берет.
Көптөгөн лабораторияларда жаан -чачындын алдын алуу үчүн аммоний оксалаты бар "Хакер" кристалл фиалкасы колдонулат
Кадам 2. Кристалл фиалкасын акырын чайкаңыз
Слайдды эңкейтип, кир жуугуч бөтөлкөнү колдонуп, слайддын үстүнө кичине тазаланган же кран суусун чачыңыз. Суу мазактын үстүнөн агып өтүшү керек жана түз эле мазокко чачпаш керек. Ашыкча чайкабаңыз. Бул грам -позитивдүү бактериялардагы боекторду кетире алат.
Кадам 3. Жайынды йод менен жууп, андан кийин чайкоо керек
Йод менен мазутту тазалоо үчүн тамчылаткычты колдонуңуз. Аны кеминде 60 секундга калтырыңыз, андан кийин жогоруда көрсөтүлгөндөй кылдаттык менен чайкаңыз. Иод терс заряддуу ион түрүндө КВ+ менен өз ара аракеттенип, Кристалл фиалка менен йоддун ортосунда чоң бирикме комплексин түзөт (CV-I татаал комплекси)) клетканын ички жана сырткы катмарларында. Бул кошулмалардын комплекси клетканын ичинде, булганган жерлерде кристалл кызгылт көк түстү сактап калат.
Йод - агрессивдүү зат. Ингаляциядан, жутуудан же териге тийүүдөн алыс болуңуз
Кадам 4. Түс агарткычын кошуңуз, андан кийин тез жууп салыңыз
Ацетон менен этанолдун 1: 1 аралашмасы, адатта, бул маанилүү кадам үчүн колдонулат, аны кылдаттык менен белгилөө керек. Слайдды белгилүү бир бурчка коюңуз, андан кийин чайкоо үчүн колдонулган сууда кызгылт көк көрүнбөй калгыча түс агартуучу кошуңуз. Бул адатта 10 секунддан аз убакытты алат, же агартуучу ацетондун жогорку концентрациясын камтыса, андан да аз убакыт талап кылынат. Бул кадамды дароо токтотуңуз, антпесе боектор грам-позитивдүү жана терс клеткалардан кристалл фиолетти жууйт жана боечу процесси кайталанышы керек. Мурунку техниканы колдонуу менен ашыкча түстүү агартуучу каражаттарды дароо чайкаңыз.
- Таза ацетонду (95%+) алмаштырса болот. Ацетон канчалык көп колдонулса, агартуучу ошончолук тез иштейт, андыктан убакытка көбүрөөк көңүл буруу керек.
- Эгерде сиз бул кадамдын убактысын көзөмөлдөөдө кыйналып жатсаңыз, түстүү агартуучу тамчы кошуңуз.
5-кадам. Карама-каршы боёкту мазактын үстүнө чачыңыз, андан кийин чайкаңыз
Эсептегич так, көбүнчө сафранин же фуксин, грам-терс жана грам-позитивдүү бактериялардын контрастын жогорулатуу үчүн колдонулат, түсүн жоготкон (түссүз) бактерияларды, б.а. грамм-терс бактерияларды, кызгылт же кызыл түскө боёп, 45 секунддан кем эмес калтырыңыз, андан кийин чайкоо.
Фуксин көптөгөн грам терс бактерияларды интенсивдүү түрдө булгап коет, мисалы Haemophilus spp жана Legionella spp. Бул ыкма үйрөнчүктөр үчүн жакшы
Кадам 6. Слайдды кургатуу
Аларды ачык абада кургатуу үчүн кургатсаңыз болот, же ушул максатта сатылган библиялык кагазды колдонуп кургатсаңыз болот.
3 -метод 3: Бояуу Жыйынтыгын Текшерүү
Кадам 1. Жарык микроскопун даярдаңыз
Слайдды микроскоптун астына коюңуз. Бактериялар өлчөмү боюнча абдан айырмаланат, андыктан талап кылынган жалпы чоңойтуу 400xтен 1000xке чейин өзгөрөт. Тагыраак сүрөт үчүн чөмүлүү майы бар объективдүү линза сунушталат. Чөмүлүүчү майды слайдга түшүрүп, көбүкчөлөрдүн пайда болушуна жол бербөө үчүн тамчылатып жатканда кыймылга жол бербеңиз. Объективдүү линза ордуна келип, майга тийип турушу үчүн микроскоптун линзасынын туткасын жылдырыңыз.
Майга чөмүлүү "кургак" линзаларга эмес, атайын жасалган линзаларга гана колдонулушу мүмкүн
Кадам 2. Грам позитивдүү жана грам терс бактерияларды аныктоого аракет кылыңыз
Слайдды жарык микроскоп менен карап көрүңүз. Грам-позитивдүү бактериялар кызгылт көк түстө көрүнөт, анткени кристалл кызгылт көк клетканын капталынын ичинде камалып турат. Грам терс бактериялар кызгылт же кызыл түскө ээ болот, анткени кристалл фиалка кызгылт каршы боёк кирген ичке клетка дубалдары аркылуу чайкалат.
- Эгерде үлгү өтө коюу болсо, анда натыйжа жалган оң болушу мүмкүн. Жыйынтыктын туура экенине ынануу үчүн, бардык грам позитивдүү бактерияларды көрсөтсө, жаңы үлгүнү боёгула.
- Эгерде сиз өтө көп түстүү агарткычты колдонсоңуз, анда натыйжа жалган терс болушу мүмкүн. Жыйынтыктын туура экенине ынануу үчүн, бардык грамм терс бактерияларды көрсөтсө, жаңы үлгү салыңыз.
Кадам 3. Сиз көргөн жыйынтыктарды шилтеме сүрөтү менен салыштырыңыз
Эгерде сиз бактериялардын кандай экенин билбесеңиз, көбүнчө формасы жана грам түсү боюнча иреттелген шилтеме сүрөттөрүнүн коллекциясын изилдеңиз. Сиз ошондой эле онлайн маалымат базаларын [Улуттук микробдук патогендердин маалымат базасы, Сүрөттөгү бактериялар жана башка көптөгөн онлайн сайттарынан көрө аласыз. Идентификациялоону жеңилдетүү үчүн, төмөндө көбүнчө Грам статусуна жана формасына жараша классификацияланган же диагноз үчүн маанилүү болгон бактериялардын мисалдары келтирилген.
4-кадам. Грам-позитивдүү бактерияларды формасына карап аныктаңыз
Бактериялар микроскоп астында формасына жараша классификацияланат, көбүнчө кокки (тоголок) же таякча (цилиндрдик). Бул жерде формасына жараша грам позитивдүү бактериялардын (кызгылт көк) мисалдары:
- Грам позитивдүү кокс көбүнчө стафилококктор (топтун коккаларын билдирет) же стрептококкдор (чынжыр кокктарды билдирет).
- 'Bacillus, Clostridium, Corynebacterium жана Listeria сыяктуу грам позитивдүү таякчалар. Таяк бактериялар Actinomyces spp. көбүнчө бутактары же жипчелери бар.
Кадам 5. Грам терс бактерияларды аныктоо
Грам терс бактериялар (кызгылт түс) көбүнчө үч топко бөлүнөт. Коккалардын формасы тоголок, таяктары узун жана ичке, ортосунда коккоид таякчалары бар.
- Грам терс кокки Көбүнчө Neisseria spp.
- Грам терс таякчалар мисалы, E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Pseudomonas жана башкалар. Vibrio холерасы кадимки сабак же бүктөлгөн сабак катары каралышы мүмкүн.
- Грам терс "coccoid" (же "coccobacilli") таяк бактериялары Мисалы, Bordetella, Brucella, Haemophilus жана Pasteurella
Кадам 6. Эгерде жыйынтыктар аралашып кетсе, кылдат текшериңиз
Кээ бир бактериялардын клетка дубалынын морт же мом мүнөзүнөн улам так түстүү болушу кыйын. Бул бактериялар бир эле клеткада же башка бир клеткада кызгылт же кызгылт түстөгү аралашманы көрсөтүшү мүмкүн. 24 сааттан ашкан бактериялык үлгүлөр бул көйгөйдү көрсөтө алат, бирок ошондой эле кээ бир бактериялык түрлөрү бар, алар ар кандай үлгү алуу курагында түстүү бойдон калууда. Бул бактериялар кислотага тез боёлуу, бактериялык культурада байкоо жүргүзүү, TSI маданият каражаттары же генетикалык тестирлөө сыяктуу дагы атайын тесттерди талап кылат.
- Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium жана Propionibacterium spp. баары грам-позитивдүү бактериялар, бирок көбүнчө так боёлгон эмес.
- Treponema, Chlamydia жана Rickettsia spp сыяктуу кичинекей, ичке бактериялар. Грам ыкмасы менен боёо кыйын.
Кадам 7. Калган керектөө материалдарын жана жабдууларды жок кылыңыз
Бул таштандыларды тазалоо процедурасы лабораторияларда ар кандай болот жана колдонулган материалдарга жараша болот. Адатта, боёктогу суюктук коркунучтуу калдыктар деп белгиленген бөтөлкөлөргө ташталат. Слайддарды 10% агартуучу эритмеге чылап, андан кийин курч контейнерге таштаңыз.
Кеңештер
- Үлгү жакшы болгондо гана Gram тагы натыйжалары жакшы болорун унутпаңыз. Бейтаптарга жакшы үлгү (мисалы, какырык үлгүсүн алуу үчүн түкүргөн менен жөтөлдүн ортосундагы айырма) бере алгыдай кылып маалымат берүү маанилүү.
- Түстүү агартуучу катары этанол ацетонго караганда жайыраак реакцияга кирет.
- Коопсуздукту камсыз кылуу үчүн лабораториялык стандарттык эрежелерди карманыңыз.
- Практикага жаак таякчасын колдонуңуз, анткени анын курамында грам-оң жана грам-терс бактериялар бар. Эгерде сиз бактериялардын бир гана түрүн көрсөңүз, анда сиз өтө аз же өтө агартуучу каражатты колдонуп жаткандырсыз.
- Слайдды бекемдөө үчүн жыгач илгичтерди колдонсоңуз болот.
Эскертүү
- Ацетон жана этанол күйүүчү заттар. Ацетон колуңуздагы майды кетирип, териңизге башка химиялык заттарды сиңирүүнү жеңилдетет. Мээлей кийип, этияттык менен колдонуңуз.
- Gram же каршы боёкту чайкоодон мурун, мазактын кургап кетишине жол бербеңиз.
Сизге эмне керек
- Тармак үлгүсү
- Айнек слайд
- Пипетка
- Чакан өрт булагы, же жылыткыч же метанол
- Суу
- Кристалл фиалка
- Йод
- Түс агартуучу, мисалы, спирт же ацетон
- Safranin
